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课件网) 1.2 发酵工程的无菌技术第2课时 微生物的纯培养 由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。 1.概念： 2.内容： 1）配制培养基 2）灭菌（培养基和器具） 3）微生物接种 4）分离 5）恒温箱中培养 在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。 一、平板划线法分离和纯化微生物 ①酵母菌是兼性厌氧型单细胞真菌，可以进行出芽生殖，也可以进孢子生殖； ②培养的最适pH为4.5～5.0，最适生长温度为28～30 ℃； ③可以用液体培养基培养，也可以用固体培养基培养，但要获得纯化的酵母菌菌落，则需要通过固体培养基培养。 走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落 酵母菌 (1)实验目的 尝试通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落。 (2)实验原理 ① 培养基能满足酵母菌生长、繁殖的营养需要； ② 是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法之一。 马铃薯葡萄糖琼脂 平板划线法 (3)实验器材和试剂 酵母菌样本(菌种)；接种环、酒精灯、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅；马铃薯葡萄糖琼脂培养基。 走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落 （4）实验步骤 ②培养基和培养皿灭菌：放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为103kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-20min。 用牛皮纸包扎已配制的培养基 已包好的培养皿 高压蒸汽灭菌锅灭菌 ①配制马铃薯葡糖糖琼脂培养基并调pH ＋ → 走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落 倒平板的具体操作： ③倒平板： 待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 倒平板注意事项： ①温度：50℃左右 ②操作：在酒精灯火焰附近 ③冷凝后平板倒置 1 2 3 4 1.拔出锥形瓶的棉塞 2.将瓶口迅速通过火焰2~3次，并转动瓶口，确保瓶口灭菌 3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10-20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖 4.等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置 走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落 走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落 1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。 2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 最好不要用这个平板培养微生物。 防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。 4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？ 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 因为平板凝固后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可避免培养基中的水分过快蒸发。 讨 论： 平板划线法：通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，从而获得单个菌落的方法。 菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面 或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。 单菌落：一般由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的纯种菌落,即单菌落。 微生物群 连续划线 分散或稀释 单个细胞 单个菌落 生长繁殖 走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落 ④平板划线和培养 操作步骤 在一个倒有培养基的培养皿的皿底外侧面中央用记号笔画一直线，再在此线中间处画一垂直线，将培养皿分成三个区域：第1区域、第2区域、第3区域，分别标上“1”“2”“3”字样。 1 2 3 走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落 接种划 ... ...
