(
课件网) 第2节 微生物的培养技术及应用 第1章 传统发酵技术的应用 第2课时 酵母菌的纯培养 三、微生物的纯培养 由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。 1.概念： 2.内容： （1）配制培养基 （2）灭菌（培养基和器具） （3）微生物接种 （4）分离 （5）恒温箱中培养 酵母菌的纯培养 探究-实践 分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。 1、菌落： 2、纯培养： 采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。 3、原理： 微生物群 分散或稀释 单个细胞 单个菌落 繁殖 方法步骤 1、制备培养基 1）配制培养基 称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml. 2）灭菌 将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min.将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌2h. 包器材 倒平板的具体操作： 3）倒平板 ———待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 1.拔出锥形瓶的棉塞 2.将瓶口迅速通过火焰 3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基到人，立即盖上皿盖。 4.等待培养皿冷却后，将培养皿倒过来放置。 灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。 倒平板注意事项： ①温度：50℃左右 ②操作：在酒精灯火焰附近 ③冷凝后平板倒置 1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。 2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 最好不要用这个平板培养微生物。 防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。 4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？ 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 问题讨论 2、接种和分离酵母菌 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。 (1)原理： 单个细胞 微生物群 单个菌落 连续划线 分散或稀释 生长繁殖 连续划线法 分区划线法 (2)“平板划线”实验操作 (2)“平板划线”实验操作 1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。 2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞 3、将试管口通过火焰 .4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液 5、将试管通过火焰，并塞上棉塞 6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基 7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连 8、将平板倒置放入培养箱中培养。 划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照） 1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到 ... ...
