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课件网) 第2节 动物细胞工程 动物细胞工程 通常采用的技术手段 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 动物细胞核移植 是其他动物细胞工程技术的基础 应用 应用 克隆动物 2.2.1 动物细胞培养 一、动物细胞培养 从动物体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和繁殖。 2、原理: 细胞增殖 （有丝分裂） 1、概念: 获得细胞或细胞产物；不能获得完整动物个体。 3、目的： 克隆皮肤 皮肤烧伤 4、实例： 欲使动物细胞体外培养顺利进行，应营造怎样的环境？ 思考讨论 二、动物细胞培养的条件 二、动物细胞培养的条件 (1)合成培养基:将细胞所需的营养物质按_____严格配制而成。 种类和所需量 血清 液体 营养物质主要包括：糖类、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、微量元素等。 血清中含有多种维持细胞代谢和生长的物质，如蛋白质、氨基酸、未知的促细胞生长因子等。 (3)一般使用_____培养基,即培养液。 1、营养条件： (2)天然成分:_____等。 二、动物细胞培养的条件 2、无菌、无毒的环境： ①培养液和所有培养用具灭菌处理，无菌操作。 ②定期更换培养液，防止代谢物积累伤害细胞。 3、温度、pH和渗透压： 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4，也需考虑渗透压因素。 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5%CO2的CO2培养箱中） 是细胞代谢必需的 主要作用：维持培养液的pH 可添加适量抗生素 三、动物细胞培养的过程 胃蛋白酶不可以，pH不适宜。 将组织分散成单个细胞时为什么要用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理？胃蛋白酶可以吗？ 思考讨论 胰蛋白酶可以将动物组织细胞间的蛋白质成分酶解，使细胞分散开，获得单个细胞。 纤维蛋白、胶原蛋白等 三、动物细胞培养的过程 三、动物细胞培养的过程 注意：动物细胞生长特点： ①细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 （大多数细胞，少数细胞悬浮生长） 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 三、动物细胞培养的过程 细胞贴壁过程 那么什么是接触抑制？ 注意：动物细胞生长特点： ②接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖的现象 ①细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。（大多数细胞，少数细胞悬浮生长） 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 三、动物细胞培养的过程 接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 接触抑制 三、动物细胞培养的过程 三、动物细胞培养的过程 保存10代以内的细胞，因为10－50代部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展 三、动物细胞培养的过程 板书内容： 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养前处理 取材 培养基的物理性质 培养基的成分 特有成分 植物细胞的全能性 细胞增殖 离体 用机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶将组织细胞分散开 离体植物器官、组织、细胞 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 固体 液体(又称培养液) 有机营养成分 无机营养成分 植物激素 糖类、氨基酸、无机盐、维生素等营养物质及一些天然成分如血清 植物激素 血清 小结：植物组织培养和动物细胞培养的比较 植物组织培养 动物细胞培养 特殊环境条件 结果 是否体现细胞的全能性 过程 相同点 再分化需光 气体环境 一般获得新的植株 获得大量细胞 是 否 ①培养过程中细胞都进行有丝分裂，不涉及减数分裂； ②均需无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件。 取动物组织 制成细胞悬液 转入培养液进行原代培养 分瓶 进行传代培养 外植体 脱分化 愈伤组织 再分化 ... ...
