章末强化练(三) 1.A [解析] 通常提取囊胚期滋养层细胞的DNA作为复制模板,A错误;PCR反应需要提供含DNA模板、两种引物、四种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶的缓冲溶液,B正确;PCR反应中,DNA分子数以指数形式增加,若扩增时间相同且原料充足,获得DNA的量与模板DNA及引物的量呈正相关,C正确;SRY基因是Y染色体上的性别决定基因,所以SRY探针能与雄性胚胎样品中的DNA配对,形成杂合双链,D正确。 2.B [解析] 靛蓝能够稳定显色,不受pH的影响,且显色位置是细胞质基质,故本方案中无须转入能调控液泡pH的基因,A正确;将sfp基因插入Ti质粒时若使用的限制酶是PmeⅠ和BamHⅠ,则会将终止子1切除,故只能用BamHⅠ,B错误;由题图可知,sfp和idgS基因具有各自的启动子,表达是相互独立进行的,C正确;将目的基因导入植物细胞可采用农杆菌转化法,农杆菌可将Ti质粒上的T-DNA整合到白玫瑰的染色体DNA上,D正确。 3.B [解析] 由于DNA和RNA之间可进行碱基互补配对,因而sgRNA可以特异性识别目标DNA分子,Cas9蛋白作用于磷酸二酯键,进而可以将目标基因剪切下来,A、C正确;sgRNA序列越短,DNA分子上与其互补的特定序列会越多,错误结合概率越高,脱靶率越高,B错误;每个sgRNA可以特异性识别一个特定的DNA序列,为了增加切割的精确性和效率,通常至少需要设计两个序列不同的sgRNA与目标DNA的不同部位结合,从而更有效地实现基因敲除,D正确。 4.B [解析] 将基因表达载体导入植物细胞常用的方法是农杆菌转化法,A正确;如果用SphⅠ酶切已整合了双向启动子及LUC基因的质粒就会破坏LUC基因,B错误;如果成功导入含有壮观霉素抗性基因的基因表达载体,受体细胞就具有抗壮观霉素的能力,在含有壮观霉素的培养基上能生存,C正确;双向启动子如果正常表达,就会合成荧光素酶和β-葡萄糖苷酶,催化底物分别产生荧光和生成蓝色物质,从而确定双向启动子的作用,D正确。 5.A [解析] PCR技术的原理是DNA的半保留复制,其中双链DNA解聚为单链依靠的是高温,不需要解旋酶,A错误;PCR技术用到的引物之间的碱基序列不能互补,以免影响引物与模板链的结合,B正确;DNA聚合酶只能从引物的3'端开始延伸DNA子链,C正确;循环次数相同时,荧光值越高证明DNA含量越高,D正确。 6.(1)引物 4种脱氧核苷酸(或dNTP) (2)防止Ti质粒发生自身环化 2 (3)T-DNA 无色物质K (4)显微注射法 动物病毒 (5)蛋白质 [解析] (1)在利用PCR技术获取目的基因的过程中,以从生物材料中提取的DNA作为模板,利用引物寻找HSA基因的位置并进行扩增,PCR的原料是四种脱氧核糖核苷酸(或dNTP)。(2)构建基因表达载体的过程中,用碱性磷酸酶处理Ti质粒,是为了防止Ti质粒发生自身环化,但HSA基因不用碱性磷酸酶处理,以便二者可以连接;由于在上述条件下,碱性磷酸酶除去了质粒末端核苷酸的5'磷酸,所以DNA连接酶只能使HSA基因和Ti质粒之间形成2个磷酸二酯键。(3)过程①中需将植物细胞与农杆菌混合后共同培养,旨在通过农杆菌的转化作用,让T-DNA进入植物细胞;由于报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色,所以除尽农杆菌后,还须转接到含无色物质K的培养基上筛选出转化的植物细胞。(4)将目的基因导入动物细胞,采用最多,也是最有效的方法是显微注射法,还可以使用动物病毒作为载体,实现转化。(5)为检测HSA 基因是否成功表达,可提取受体细胞的蛋白质,用抗人血清白蛋白的抗体与之进行抗原—抗体杂交实验。 7.(1)(总)RNA cDNA 牛凝乳酶基因两端的脱氧核苷酸序列(或一段已知的目的基因核苷酸序列) (2)PvitⅡ和EcoRⅠ T4 DNA连接酶 (3)CaCl2 (Ca2+) 一种能吸收周围环境中DNA分子 (4)氨苄青霉素 2 [解析] (1)利用RNA获得cDNA的过程称为逆转录,因此为获取牛凝乳酶基因,提取小牛胃黏膜组织中的总RNA,再经逆转录过程得到cDNA,将其作为PCR反应的模板。本实验要扩增的 ... ...
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